大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）試劑盒樣本處理及要求

產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）試劑盒

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）的含量。

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

實(shí)驗原理：

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣本處理及要求：

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會(huì )影響測量結果），稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實(shí)驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會(huì )影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測。