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氨基酸(AA)檢測試劑盒
氨基酸(AA)檢測試劑盒
產(chǎn)品名稱(chēng) :氨基酸(AA)檢測試劑盒
貨號 :YX2159
產(chǎn)品規格 :100T
儲存條件 :4℃。避光
有效期 :6個(gè)月
產(chǎn)品簡(jiǎn)介 :
檢測原理是在弱酸條件下,氨基酸與茚三酮共熱情況下能定量的產(chǎn)生藍紫色的二酮茚胺(又稱(chēng)Ruhemans紫),其吸收峰在波長(cháng)570nm處,在一定范圍內顏色深淺(即吸光度)與氨基酸濃度成正比,該試劑盒主要用于檢測植物組織、血清、尿液、食品、藥品等中的總游離氨基酸含量。
實(shí)驗流程:
1、 準備樣品
①植物樣品:取新鮮植物組織,稱(chēng)取0.4g,按植物組織:AA Lysis buffer(1×)=0.4g:2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)勻漿或研磨,用無(wú)氨蒸餾水稀釋至40ml,混勻,
②血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,
③細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織裂解液,如有必要用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行勻漿,1000g離心5min,留取上清即為氨基酸粗提液
④高濃度樣品:如果樣品中含有較高濃度的氨基酸,可以使用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行恰當的稀釋。
2、配制茚三酮顯色液: 取0.3g茚三酮,溶解于50ml茚三酮稀釋液,攪拌或超聲處理至溶解,即為茚三酮顯色液。
3、配制茚三酮工作液: 取適量的茚三酮顯色液、AA Assay buffer,按茚三酮顯色液:AA Assay buffer=35:3的比例混合,即為茚三酮工作液
4、配制維生素C工作液: 取出1支維生素C,準確溶解于30ml無(wú)氨蒸餾水,混勻
5、配制系列氨基酸標準溶液:取出氨基酸標準(50μg/ml)恢復至室溫,用無(wú)氨蒸餾水將其稀釋至10μg/ml,然后按下表繼續稀釋?zhuān)?/span>
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
氨基酸標準(10μg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
無(wú)氨蒸餾水 | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0 |
氨基酸濃度(μg/ml) | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
6、AA加樣:按照下表設置空白管、標準管、測定管,溶液應按照順序依次加入
加入物(ml) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
無(wú)氨蒸餾水 | 0.30 | — | — |
系列氨基酸標準(1~5號管) | — | 0.30 | — |
待測樣品 | — | — | 0.30 |
茚三酮工作液 | 0.45 | 0.45 | 0.45 |
維生素C工作液 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
混勻,80℃中加熱20min,冰水迅速冷卻。 |
7、AA測定:加60%乙醇2.1ml,混勻;立即以空白調零,分光光度計(比色杯光徑1cm)測定標準管、測定管570nm處吸光度(記為A標準、A測定)。
025-65010873
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