描述：品名普施安紅-瓊脂糖
基質(zhì)6%交聯(lián)瓊脂糖
配基活性紅 120 ，~2 μmol/mL
粒徑范圍 a45~165 μm
平均粒徑~90 μm

1、 產(chǎn)品介紹

Red NUPharoseFF是活性紅120（又稱(chēng)普施安紅HE-3B）活性染料鍵合在NUPharose瓊脂糖微球上得到的親和填料?；钚约t120是多環(huán)染料，與NADP+具有結構類(lèi)似性，可用于純化核苷酸依賴(lài)性酶、脂蛋白、乳酸脫氫酶、纖溶酶原、肽、激素等的純化。除了作為親和填料使用，本產(chǎn)品配基含芳香環(huán)和陰離子，也通過(guò)靜電作用或者疏水相互作用進(jìn)行非親和純化。

2、 產(chǎn)品特點(diǎn)與技術(shù)指標

3、 使用方法參考

 3.1 色譜柱裝填

以下闡述與層析系統連接時(shí)，填料的色譜柱裝填方法。

（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。

（2）填料用量計算：通過(guò)沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積×壓縮比（也稱(chēng)壓縮因子）。沉降體積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降讀取的穩定體積。Red NUPharose FF的壓縮比為1.15。為使達到裝柱比，可通過(guò)柱頭下壓的方法，也可以通過(guò)高流速壓柱。

（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應體積，抽濾除去液體，并用約3倍填料體積的純化水洗滌，重復3次，以除去保存液。

（4）裝柱填料懸液準備：將填料轉移到適當的容器中，加入適量的裝柱液，制成 50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。

（5）裝填前準備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內保留少量的裝柱液，擰緊下堵頭，調整柱子使其垂直于地面。

（6）裝填：將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內（必要時(shí)使用裝柱器），為避免引入氣泡，應使之沿層析柱內壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿(mǎn)，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統連接。

（7）壓柱：使柱內填料自然沉降（或 50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處；通過(guò)高流速（推薦流速見(jiàn)下表，注意柱壓不超過(guò)0.3MPa），繼續壓柱至界面清晰穩定，標記界面穩定時(shí)的柱高。停泵，打開(kāi)柱頭上的閥門(mén)/堵頭，關(guān)閉柱底的閥門(mén)/堵頭，下壓柱頭至標記位置下方與壓縮比對應的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內的填料。

3.2  柱效測定和評價(jià)

完成裝柱后、使用前可通過(guò)柱效測定和評價(jià)可以確認層析柱裝填質(zhì)量。柱效通常用理論塔板高度（HETP）和非對稱(chēng)因子（As）來(lái)評價(jià)。

3.3  平衡與上樣（Equilibration & Loading）

在上樣前，需用緩沖液A在操作流速下平衡層析柱，該過(guò)程通常需要5~10個(gè)柱體積的緩沖液A，以電導、pH等檢測信號參數不變且與緩沖液A對應為準?？梢赃x擇磷 酸鹽、Tris-HCl等常見(jiàn)的緩沖體系。

上樣量可按“mg目標蛋白/mL填料"來(lái)設定，通常為DBC10%的50~80%，例如Red NUPharoseFF產(chǎn)品對的動(dòng)態(tài)結合載量為~15mg/mL，純化時(shí)的上樣量可為7.5~12mg/mL。除了DBC10%，也可以測試上樣流穿液中的目標蛋白確定上樣量。上樣前需要對樣品進(jìn)行離心（10000 g以上）、過(guò)濾（0.22或0.45μm）處理，以免堵塞色譜柱。

上樣后需要3~10個(gè)柱體積的緩沖液A 再平衡層析柱。

3.5 洗脫（Elution）

通常在緩沖液A中添加3 M NaCl或者2 M KCl可將目標蛋白洗脫。

3.6  再生（Regeneration）

純化后可用弱酸和弱堿性緩沖液交替沖洗色譜柱3~4 次，進(jìn)行填料再生，例如0.1mol/L NaAc+0.5mol/L NaCl（pH4.5）和0.1mol/L Tris·HCl+0.5mol/L NaCl（pH8.5）。然后用平衡緩沖溶液平衡。

3.7 在位清洗（CIP）

通常上述的洗脫和再生過(guò)程可將填料清洗。若發(fā)生柱壓升高，或為了避免交叉污染，可采用以下溶劑進(jìn)行在位清洗：0.1~0.5 mol/L NaOH、70%乙醇或30%異丙醇等。在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì)，反向效果更佳。清洗后需用3~5 柱體積的純水除去上述溶劑。

3.8  填料保存

填料的初始保存液為20%乙醇，使用過(guò)后可繼續用20%乙醇并添加0.5M NaCl保存。保存溫度在2~30 ℃為宜，不可凍存。

普施安紅-瓊脂糖

南京億迅生物科技有限公司出品的各類(lèi)干擾物質(zhì)，產(chǎn)品質(zhì)量穩定，價(jià)格實(shí)惠，在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽(yù)。

該類(lèi)產(chǎn)品還有：3-氨基苯硼酸-瓊脂糖，硫酸酯-交聯(lián)纖維素，硫酸葡聚糖-瓊脂糖，大豆胰蛋百酶抑制劑-瓊脂糖，藍膠-瓊脂糖等。

歡迎各界用戶(hù)來(lái)電或留言垂詢(xún)，無(wú)論您是親自下單，還是咨詢(xún)技術(shù)問(wèn)題，我們將為您真誠服務(wù)。